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新型式藻类的超声波萃取方法的优化方法
2014-08-08 15:58:56 来源：
超声波法提取螺旋藻多糖的条件优化用正交实验对提取的影响因素如：时间、pH及温度进行优化。选用正交表L2535，因素-水平设计。
螺旋藻多糖的提取称取螺旋藻干粉25份，每份质量为10.00g，分别置于25个烧杯经乙醇脱脂后，加200mL的蒸馏水按照正交实验设计调整pH、温度，分别在频率为28HZ的超声波超声处理不同的时间，提取液经离心去沉淀，重复两遍，上清液用三氯乙酸去蛋白，乙醇处理后得沉淀，经干燥处理后得多糖粗品.提取所得的多糖粗品烘干后用硫酸-蒽酮法测定总糖的含量，总糖的含量的计算方法：总糖的含量=溶液中多糖测定浓度/粗提物质量浓度@100%，多糖提取率=粗提物质量/原料质量@100%，多糖提取量=粗提物质量@总糖的含量，考马斯兰法测定粗品中的蛋白质含量。
并根据正交实验的结果，比较超声波提取法与常规水提取法的差异。提取的螺旋藻多糖体外抗肿瘤试验体外对卵巢癌SKV3细胞生长的影响：取对数生长期的SKV3细胞，用含10%胎牛血清DMEM培养液调整细胞浓度为5@103个细胞/mL，铺在96孔培养板上，1@104个细胞/孔，终体积为200L，l体外培养12h后更换为浓度在10至100ug/mL的螺旋藻多糖培养液，体外培养48h后以MTT法检测肿瘤细胞抑制率。
抑制率（%）=（对照组平均OD值-实验组平均OD值）/对照组平均OD值@100%.结果螺旋藻多糖提取量的比较正交实验结果表明螺旋藻干粉在pH11和60e的水浴条件下用超声波提取60min得到的螺旋藻多糖的量*多。根据极差分析结果，影响螺旋藻多糖提出率的3个因素（pH、提取时间、温度）中，以pH的影响*大，其次是提取的时间和温度。比较超声波提取法与水浴提取法在提出率、粗品中的糖含量（结果见所示）。
条件优化后超声波法比单纯水体法得提取量显著提高（P两种方法提取的螺旋藻多糖的抗肿瘤活性的比较两种提取方法得到的螺旋藻多糖对SKV3癌细胞株的作用结果表明：两种提取方法得到的粗提物都能有效的抑制卵巢癌SKV3细胞株的生长（MTT法抑瘤率分别为43.0133.497%和39.26531293），并呈现出良好的量效关系；超声波法提取的螺旋藻多糖的抑瘤作用高于水浴提取法得到的螺旋藻多糖，但两者比较没有显著性差异（P>0.05）。时间、pH值和温度三个因素分别对螺旋藻提取量的影响4讨论螺旋藻多糖的组成十分复杂，主要由鼠李糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、葡萄糖醛酸、木糖、岩藻糖等组成。
目前*常用的糖含量测定方法是蒽酮一硫酸比色法和苯酚-硫酸比色法。但在实际工作中，特别是在测定天然产物中的糖含量时，发现测得的结果常常与实际情况不符。超声波法提取螺旋藻多糖时，超声时间不宜过长，超声处理60min时提取量达到*大，随着处理时间的延长，提取率反而下降。
原因可能是由于超声波具有较强的机械剪切作用，长时间的作用会使大分子的多糖断裂，从而在后处理的过程中的损失增大而影响多糖的提出率。螺旋藻多糖的提取量过程中，当温度太高时大分子的多糖局部结构会发生变化，从而影响提取效果。pH对螺旋藻多糖的提取的影响比较复杂，我们的实验结果显示在pH11时得到*大提取量。
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